酵母双杂交筛选服务

       蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究蛋白间相互作用的一种有效技术手段。转录活化蛋白可以和DNA上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA结合与转录激活的功能是由其上两个相互独立的结构域，即DNA结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain,AD)共同完成的。

       以Gal4系统为例，BD和AD分别由Gal4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa与768-881aa)构成。在利用GAL4系统筛选cDNA文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD可以与GAL4上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的AD则不能与GAL UAS结合；只有当BD与AD分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD与AD才能与GAL UAS结合并且引起报道基因的转录，从而激活下游报告基因，通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。

艾柏森生物提供如下服务内容：

酵母双杂交文库的构建：

1. 总RNA提取及mRNA纯化；
2. SMART技术合成cDNA一链，LD-PCR合成双链cDNA；          
3. 双链cDNA的纯化；      
4. 转化AH109酵母感受态细胞；          
5. 收集转化子及检测文库质量。

酵母双杂交诱饵载体的构建：

克隆cDNA全长序列，构建包含目的基因的PGBKT7诱饵载体，转化Y187酵母菌株。

酵母双杂交筛选及鉴定

您需要提供以下材料：

1. 新鲜组织材料、冻存材料或高质量RNA、诱饵基因的模板。
2. 尽可能全面的实验相关信息。

您将获得以下结果：

构建好的双杂交文库甘油菌：

1. 文库容量≥10⁶；
2. 文库滴度≥10⁷cfu/ml；
3. 插入片段平均大于1kb（不同物种略有差别）；
4. 减低高丰度表达基因10-100倍。
酵母双杂交筛选得到的阳性克隆
实验过程报告及相关数据图片

服务周期：

文库构建1个月
文库筛选1-2个月

网址：
       http://www.abiocenter.com/h-col-218.html

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